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Metodi
I metodi disponibili sono tre e differiscono nel tipo di risultato finale e nel valore di endotossina rilevabile indicata con EU/ml (Unità di Endotossine per millilitro):
GEL CLOT
Metodo qualitativo o semi-quantitativo in cui viene sfruttata la caratteristica del lisato delle cellule del sangue del Lymulus di formare un coagulo compatto sul fondo della provetta in presenza di endotossine. La lettura dei risultati, dopo 60 minuti di incubazione in termostato a secco a 37°C, si esegue semplicemente capovolgendo la provetta di 180°ed osservando la presenza di un coagulo compatto che non si stacca dal fondo. Esistono 4 tipologie diverse di lisato che si differenziano per la massima sensibilità di determinazione endotossinica: 0,25 EU/ml, 0,125 EU/ml, 0,06 EU/ml e 0,03 EU/ml.
TURBIDIMETRICO
Metodo di analisi cinetico quantitativo in cui il lisato sviluppa torbidità in presenza di endotossine; maggiore è la concentrazione di endotossina nel campione, più velocemente si sviluppa torbidità che viene letta come valore di densità ottica (OD). Con il metodo cinetico-turbidimetrico si determina sia l’incremento quantitativo della torbidità, sia il tempo impiegato dalla reazione per raggiungere un particolare livello di torbidità ( tempo limite o valore soglia). Il test richiede l’impiego di una specifica apparecchiatura, PyrosKinetix con software dedicato, per incubare i campioni ad una temperatura controllata di 37°C e per leggere i valori di OD ad intervalli regolari. I valori di endotossina nei campioni vengono calcolati sulla curva standard costruita con diverse concentrazioni note di endotossina di riferimento internazionale. L’analisi turbimetrica è molto rapida, semplice e soprattutto molto sensibile: è possibile determinare fino a 0.001 EU/ml.
CROMOGENICO
Metodo di analisi quantitativo cinetico o end-point in cui il lisato sviluppa colore in presenza di endotossine; maggiore è la concentrazione di endotossina nel campione, più velocemente viene emesso colore che viene misurato come valore di densità ottica (OD). Il test richiede l’impiego di una specifica apparecchiatura, un lettore di
micropiastre ELX808I con software dedicato, con possibilità d’incubazione a 37°C. I valori di endotossina nei campioni vengono calcolati sulla curva standard costruita con diverse concentrazioni note di endotossina di riferimento internazionale. Con il metodo cromogenico è possibile rilevare fino a 0.005 EU/ml.
RICERCA DEI b-GLUCANI
Metodo quantitativo cromogenico altamente sensibile e rapido nell’ identificazione dei (1-3)-b-D-glucani nel siero.
Il metodo di analisi è quello cromogenico: il lisato sviluppa colore in presenza di -D-glucani; maggiore è la concentrazione di -D-glucani nel campione, più velocemente viene emesso colore che viene misurato come valore di densità ottica
(OD). Il test richiede l’impiego di una specifica apparecchiatura, un lettore di
micropiastre ELX808I con software dedicato, con possibilità d’incubazione a 37°C. I valori di b-D-glucani nei campioni vengono calcolati sulla curva standard costruita con diverse concentrazioni note di b-D-glucani di riferimento.
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